SOP文件:抗酸培养阴性和支原体培养检验操作程序
SOP文件:抗酸培养阴性和支原体培养检验操作程序
一、抗酸培养阴性检验操作程序
1、仔细查对标本标签与检验单是否正确，标本质量是否合格，若收检标本与检验单查对正确，标本质量合格则进行接收检验，否则查找原因并在有关记录本上记录。
2、标本处理、检验与结果报告：
液性引流标本(如腹水、尿液、CSF等)直接离心留沉淀物，杂菌污染标本(如大便、痰等)取样置无菌管，加入1N NaOH1ml作用30分钟，再加入1N HCl1ml中和，3000转/分钟离心5分钟，取沉淀物100μl量接种罗氏培养基，置37℃温箱培养。
每星期观察一至两次培养基斜面，结果连续观察七个星期以上未发现有可疑菌落生长，报告未培养出分枝杆菌。
二、支原体培养检验操作程序
1、接收标本：标本与检验单查对正确，标本质量合格。
2、标本处理：接种Uu、Mh培养药敏一体试剂盒：操作前将所需试剂取出置室温30分钟。1、A排第一孔加入培养液100μL作为阴性对照;2、将标本拭子直接放入培养液中充分振荡并在瓶壁挤干拭子，若为男性尿液取离心沉淀物150μL或阳性标本取50μL于培养液中混匀。3、将混有标本的培养液各100μL加入A排余下及B排各孔中;4、各孔加矿物油覆盖，置于37℃温箱培养。
第24、48小时分别观察记录结果。结果判断原理：培养基含有相应支原体生长所需的蛋白质、马血清、生长因子、底物及酚红指示剂，当有支原体生长时，底物被分解，使PH值升高，培养基由橙黄色变成红色，且清亮为阳性。培养基不变色为阴性。B1孔阳性为解脲支原体阳性;B2孔阳性为人型支原体阳性。药敏孔A排为高浓度，B排为低浓度，变红则耐药，不变红示敏感而不生长。当高浓度与低浓度两孔均不生长(不变色)为该药敏感;高浓度不变色低浓度变红为该药物中介;高浓度与低浓度均变红为该药物耐药。
结果一：第24 小时B1孔由橙黄色变成红色示解脲支原体阳性，药敏看结果判断;第24小时、48小时观察B2孔均不变色，示无人型支原体生长或浓度极低，报告培养出解脲支原体，未培养出人型支原体。结果二：第24 小时B1孔不变色示解脲支原体阴性;第48小时观察B2孔由橙黄色变成红色示人型支原体阳性，药敏看结果判断。报告未培养出解脲支原体，培养出人型支原体附药敏结果。
结果三：第24 小时B1孔由橙黄色变成红色示解脲支原体阳性，药敏看结果判断;第48小时观察B2孔由橙黄色变成红色示人型支原体阳性，药敏看结果判断，报告培养出解脲支原体与人型支原体附药敏结果。
结果四：阳性对照孔由橙黄色变成红色示支原体阳性，药敏看结果判断;第24小时、48小时观察B1孔、B2孔均不变色，示无解脲、人型支原体生长或浓度极低，报告培养出非解脲、人型支原体或嘱病人重留标本复查。
结果五：第24、48小时观察B1孔、B2孔均不变色，示无支原体生长或浓度极低，报告未培养出解脲及人型支原体。
篇2：SOP文件:真菌培养阴性操作程序
SOP文件:真菌培养阴性操作程序
1、仔细查对标本标签与检验单是否正确，标本质量是否合格，若收检标本与检验单查对正确，标本质量合格则进行接收检验，否则查找原因并在有关记录本上记录。
2、标本处理、检验与结果报告：
1)拭子、分泌物标本 标本涂于TTC-沙保罗平板成原始线，再以无菌接种环画线分离后置25℃温箱培养。
培养第24、48、72小时观察平板上有否出现可疑菌落，若继续培养至第4天未见可疑菌落，则报告未培养出真菌。
2)尿液标本 取5ml尿液,3000转/分离心5分钟，取离心沉淀物，接种环取样涂于TTC-沙保罗平板成原始线，再以无菌接种环画线分离后置25℃温箱培养。
培养第24、48、72小时观察平板上有否出现可疑菌落，若继续培养至第4天未见可疑菌落，则报告未培养出真菌。
3)引流液 标本3000转/分离心5分钟，取离心沉淀物，接种环取样涂于TTC-沙保罗平板成原始线，再以无菌接种环画线分离后置25℃温箱培养。
培养第24、48、72小时观察平板上有否出现可疑菌落，若继续培养至第4天未见可疑菌落，则报告未培养出真菌。
4)痰液或咽拭子标本 无菌接种环可疑处采样涂于TTC-沙保罗平板成原始线，再以无菌接种环画线分离后置25℃温箱培养。
培养第24、48、72小时观察平板上有否出现可疑菌落，若继续培养至第4天未见可疑菌落，则报告未培养出真菌。
5)粪便或肛拭子等肠道标本 以无菌接种环桃取可疑处标本涂于TTC-沙保罗平板成原始线，再以无菌接种环画线分离后置25℃温箱培养。
培养第24、48、72小时观察平板上有否出现可疑菌落，若继续培养至第4天未见可疑菌落，则报告未培养出真菌。
6)留置针头、小导管等标本 标本置无菌管中，加入增菌液2ml，35℃温箱培养48小时观察培养液有无混浊，采样涂于TTC-沙保罗平板成原始线，再以无菌接种环画线分离后置25℃温箱培养。
培养第24、48、72小时观察平板上有否出现可疑菌落，若继续培养至第4天未见可疑菌落，则报告未培养出真菌。
篇3：SOP文件:临床非培养标本的采集及处理操作程序
SOP文件:临床非培养标本的采集及处理操作程序
1.目的
规范临床待检标本的正确采集、送检和处理。
2.适用范围
微生物检验实验室的所有临床检测标本。
3.职责
3.1 所有采集标本的人员均需按本SOP操作，实验室工作人员有责任向临床医生、护士或病人宣教。
3.2 本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
4.操作程序
4.1 本实验室检测标本为：血清或血浆、痰、生殖道拭子标本、尿液及脑脊液和胸腹水。
4.2 做好标本签收，核对检验单与标本标签是否清楚无误，送检标本是否正确、合格，给所有标本按顺序编号，按如下操作规程操作。
4.3 查找抗酸菌操作:将标本置于水浴蒸箱加温杀菌30分钟，取标本残留物或沉淀物加温涂布玻片，液性标本以3000转/分钟离心5分钟，取标本残留物或沉淀物加温涂布玻片并标注编号后固定，行抗酸染色，先滴加抗酸染色第一液加温(用酒精灯在玻片下来回加温置染色液冒热气，但无气泡产生为宜)染色10分钟，自来水冲洗净染液，以硫酸美兰复染2分钟，水洗凉干。
镜检与报告：油镜下查找分枝、不规则红色杆菌，按如下标准进行结果报告。
1)、镜检100-300个视野(时间不少于4分钟)未发现抗酸菌，继续观察至300个视野仍未发现抗酸菌者报告抗酸菌(—);
2)、镜检100个视野找到抗酸菌1-2条者，报告抗酸菌可疑(±)，或重涂片或重送标本检查;
3)、镜检100个视野找到抗酸菌3-9条者，报告抗酸杆菌阳性(+);
4)、镜检10个视野找到抗酸菌1-9条者，报告抗酸杆菌阳性(2+);
5)、镜检每个视野找到抗酸菌1-9条者，报告抗酸杆菌阳性(3+);
6)、镜检每个视野找到抗酸菌多于9条者，报告抗酸杆菌阳性(4+)。
4.4 查找普通细菌操作：液性标本取离心沉淀物涂片，拭子或脓性标本直接涂布玻片并标注编号后固定。同时取大肠标准株(ATCC25922)和金黄色葡萄球菌标准株(ATCC25922)涂片，一起行革兰氏染色，先滴加第一液染色1分钟，水洗，加第二液媒染1分钟，水洗干净;以95%酒精脱色30秒钟后立即水洗，再加第四液复染30秒钟，水洗后凉干。油镜下查找菌体并观察球杆比例;观察质控菌是否合格。
4.5 墨汁染色查找隐球菌：液性标本离心取沉淀物涂片，脓性或拭子标本直接涂片并写号，以无菌接种环粘取少量印度墨汁与玻片上标本混匀，压盖玻片，先低倍镜下找到视野再转离倍镜观察。若找到透亮，圆形强折光，有厚荚膜的菌体报告墨汁染色阳性;否则报告阴性。
4.6 白带常规检查：盐水管直接将棉签点至玻片后以高倍镜检有无滴虫;涂片标注编号后固定，行革兰氏染色，先滴加第一液染色1分钟，水洗，加第二液媒染1分钟，水洗干净;以95%酒精脱色30秒钟后立即水洗，再加第四液复染30秒钟，水洗凉干后镜检查找革兰氏阴性双球菌、霉菌或阳性球菌、线索细胞等。阴道清洁度的按如下判断标准报告：
Ⅰ度：阴道杆菌为主，并可见大量上皮细胞。
Ⅱ度：有部份阴道杆菌，但亦有部份脓细胞和杂菌，上皮细胞少见。
Ⅲ度：仅见少量阴道杆菌和上皮细胞，有大量脓细胞和杂菌。
Ⅳ度：镜下无阴道杆菌，除少量上皮细胞外，主要的几乎全是脓细胞和大量杂菌。
4.7 肥达试验：标本标明编号，以3000转/分钟离心5分钟;取试管架，按每标本排5排试管，每排5支;各标本用加样器取100μl血清置于一支稀释用试管(注明检验号)中，加入1.9ml 0.9%生理盐水混匀，第一排加入1：20倍稀释血清各0.2ml，成1：40倍;后稀释管再加入1.0ml 0.9%生理盐水，成1：40倍稀释，加入第二排试管各0.2 ml。同样方法对倍稀释至第四排试管，第五排各加入0.2ml 0.9%生理盐水作阴性对照。从冰箱中拿出肥达反应试验稀释菌悬液，第一列各加入H诊断菌液0.2 ml,第二列各加入O诊断菌液0.2 ml，第三列各加入甲型诊断菌液0.2 ml,第四列各加入乙型诊断菌液0.2 ml, 第五列各加入丙型诊断菌液0.2 ml,混匀，置37℃水浴箱18-24小时。
结果判断：菌体沉淀至试管底成圆点为阴性管，出现散在颗粒状凝集为阳性管。以最高稀释管出现散在颗粒状凝集为报告滴度。若阴性对照出现凝集则需重新稀释配制诊断菌悬液重做试验。
4.8 外菲氏试验：标本标明编号，以3000转/分钟离心5分钟;取试管架，按每标本排3排试管，每排5支;各标本用加样器取100μl血清置于一支稀释用试管(注明检验号)中，加入1.9ml 0.9%生理盐水混匀，第一排加入1：20倍稀释血清各0.2ml，成1：40倍;稀释管留1.0ml再加入1.0ml 0.9%生理盐水，成1：40倍稀释，加入第二排试管各0.2 ml。同样方法对倍稀释至第四排试管，第五排各加入0.2ml 0.9%生理盐水作阴性对照。从冰箱中拿出外菲氏反应试验稀释菌悬液，第一列各加入OX19诊断菌液0.2 ml,第二列各加入OX2诊断菌液0.2 ml，第三列各加入OXK诊断菌液0.2 ml,混匀，置37℃水浴箱18-24小时。
结果判断：菌体沉淀至试管底成圆点为阴性管，出现散在颗粒状凝集为阳性管。以最高稀释管出现散在颗粒状凝集为报告滴度。若阴性对照出现凝集则需重新稀释配制诊断菌悬液重做试验。
5.引用表格
5.1拒收标本记录表：
篇4：SOP文件:苛养菌培养阴性操作程序
SOP文件:苛养菌培养阴性操作程序
1、仔细查对标本标签与检验单是否正确，标本质量是否合格，若收检标本与检验单查对正确，标本质量合格则进行接收检验，否则查找原因并在有关记录本上记录。
2、标本处理、检验与结果报告：
1)拭子、分泌物标本 标本涂于普通血琼脂平板、巧克力(含V、X因子)平板成原始线，再以无菌接种环画线分离后置C02缸，35℃温箱培养。
培养第24、48、72小时观察各平板上有否出现可疑菌落，若继续培养至第5天未见可疑菌落，则报告未培养出奈瑟氏菌、嗜血杆菌等苛养菌。
2)尿液标本 取5ml尿液,3000转/分离心5分钟，取离心沉淀物，接种环取样涂于普通血平板、巧克力(含V、X因子)平板成原始线，再画线分离后置C02缸，35℃温箱培养。
培养第24、48、72小时观察各平板上有否出现可疑菌落，若继续培养至第5天未见可疑菌落，则报告未培养出奈瑟氏菌、嗜血杆菌等苛养菌。
3)引流液 标本3000转/分离心5分钟，取离心沉淀物，接种环取样画线分离接种普通血平板、巧克力(含V、X因子)平板，置C02缸，35℃温箱培养。
培养第24、48、72小时观察各平板上有否出现可疑菌落，若继续培养至第5天未见可疑菌落，则报告未培养出奈瑟氏菌、嗜血杆菌等苛养菌。4)痰液或咽拭子标本 无菌接种环可疑处采样涂于普通血平板、巧克力(含V、X因子)平板原始线，再画线分离后置C02缸，35℃温箱培养。
培养第24、48、72小时观察各平板上有否出现可疑菌落，若继续培养至第5天未见可疑菌落，则报告未培养出肺炎球菌、嗜血杆菌等苛养菌。
5)粪便或肛拭子等肠道标本 以无菌接种环桃取可疑处标本涂于血平板、布氏血平板成原始线，再分离画线后置于C02缸，放入35℃温箱培养。另取约1g标本接种碱性蛋白胨水中，35℃温箱培养24-72小时，再转种高盐平板、中国兰平板、山梨醇麦康凯平板。
培养第24、48、72小时观察各平板上有否出现可疑菌落，若继续培养至第5天未见可疑菌落，则报告未培养出弧菌、螺杆菌等细菌。
6)留置针头、小导管等标本 标本置无菌管中，加入增菌液2ml，35℃温箱培养48小时观察培养液有无混浊，采样转种血平板、巧克力(含V、X因子)平板成原始线，再画线分离后置于C02缸，35℃温箱培养。培养第24、48、72小时观察各平板上有否出现可疑菌落，若继续培养至第5天未见可疑菌落，则报告未培养出奈瑟氏菌、嗜血杆菌等苛养菌.
篇5：细菌培养人员岗位职责内容
1.上岗人员应具有无菌试验的专业知识,能严格遵守无菌操作规程。
2.负责对血液及其成分制品、原辅材料、一次性注射器的细菌培养。
3.负责对生产部门的洁净环境、工艺卫生及人员手指的消毒灭菌效果的质量检测。
4.成品进行无菌试验时,每批抽取的样本应具有代表性,样本量符合规定要求。
5.专用无菌室应保持清洁,工作前必须消毒。
6.培养基应按药典配制,灵敏度合格,预培养无细菌生长,二周内使用完毕,过期的应作废弃物处理。
7.遵守核对制度,做到样品与送检单相符,无菌试验管编号与样品相符。
8.如确有产品被污染应立即报告,并协助生产部门查明原因。
制度专栏
