SOP文件:临床非培养标本的采集及处理操作程序
SOP文件:临床非培养标本的采集及处理操作程序
1.目的
规范临床待检标本的正确采集、送检和处理。
2.适用范围
微生物检验实验室的所有临床检测标本。
3.职责
3.1 所有采集标本的人员均需按本SOP操作，实验室工作人员有责任向临床医生、护士或病人宣教。
3.2 本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
4.操作程序
4.1 本实验室检测标本为：血清或血浆、痰、生殖道拭子标本、尿液及脑脊液和胸腹水。
4.2 做好标本签收，核对检验单与标本标签是否清楚无误，送检标本是否正确、合格，给所有标本按顺序编号，按如下操作规程操作。
4.3 查找抗酸菌操作:将标本置于水浴蒸箱加温杀菌30分钟，取标本残留物或沉淀物加温涂布玻片，液性标本以3000转/分钟离心5分钟，取标本残留物或沉淀物加温涂布玻片并标注编号后固定，行抗酸染色，先滴加抗酸染色第一液加温(用酒精灯在玻片下来回加温置染色液冒热气，但无气泡产生为宜)染色10分钟，自来水冲洗净染液，以硫酸美兰复染2分钟，水洗凉干。
镜检与报告：油镜下查找分枝、不规则红色杆菌，按如下标准进行结果报告。
1)、镜检100-300个视野(时间不少于4分钟)未发现抗酸菌，继续观察至300个视野仍未发现抗酸菌者报告抗酸菌(—);
2)、镜检100个视野找到抗酸菌1-2条者，报告抗酸菌可疑(±)，或重涂片或重送标本检查;
3)、镜检100个视野找到抗酸菌3-9条者，报告抗酸杆菌阳性(+);
4)、镜检10个视野找到抗酸菌1-9条者，报告抗酸杆菌阳性(2+);
5)、镜检每个视野找到抗酸菌1-9条者，报告抗酸杆菌阳性(3+);
6)、镜检每个视野找到抗酸菌多于9条者，报告抗酸杆菌阳性(4+)。
4.4 查找普通细菌操作：液性标本取离心沉淀物涂片，拭子或脓性标本直接涂布玻片并标注编号后固定。同时取大肠标准株(ATCC25922)和金黄色葡萄球菌标准株(ATCC25922)涂片，一起行革兰氏染色，先滴加第一液染色1分钟，水洗，加第二液媒染1分钟，水洗干净;以95%酒精脱色30秒钟后立即水洗，再加第四液复染30秒钟，水洗后凉干。油镜下查找菌体并观察球杆比例;观察质控菌是否合格。
4.5 墨汁染色查找隐球菌：液性标本离心取沉淀物涂片，脓性或拭子标本直接涂片并写号，以无菌接种环粘取少量印度墨汁与玻片上标本混匀，压盖玻片，先低倍镜下找到视野再转离倍镜观察。若找到透亮，圆形强折光，有厚荚膜的菌体报告墨汁染色阳性;否则报告阴性。
4.6 白带常规检查：盐水管直接将棉签点至玻片后以高倍镜检有无滴虫;涂片标注编号后固定，行革兰氏染色，先滴加第一液染色1分钟，水洗，加第二液媒染1分钟，水洗干净;以95%酒精脱色30秒钟后立即水洗，再加第四液复染30秒钟，水洗凉干后镜检查找革兰氏阴性双球菌、霉菌或阳性球菌、线索细胞等。阴道清洁度的按如下判断标准报告：
Ⅰ度：阴道杆菌为主，并可见大量上皮细胞。
Ⅱ度：有部份阴道杆菌，但亦有部份脓细胞和杂菌，上皮细胞少见。
Ⅲ度：仅见少量阴道杆菌和上皮细胞，有大量脓细胞和杂菌。
Ⅳ度：镜下无阴道杆菌，除少量上皮细胞外，主要的几乎全是脓细胞和大量杂菌。
4.7 肥达试验：标本标明编号，以3000转/分钟离心5分钟;取试管架，按每标本排5排试管，每排5支;各标本用加样器取100μl血清置于一支稀释用试管(注明检验号)中，加入1.9ml 0.9%生理盐水混匀，第一排加入1：20倍稀释血清各0.2ml，成1：40倍;后稀释管再加入1.0ml 0.9%生理盐水，成1：40倍稀释，加入第二排试管各0.2 ml。同样方法对倍稀释至第四排试管，第五排各加入0.2ml 0.9%生理盐水作阴性对照。从冰箱中拿出肥达反应试验稀释菌悬液，第一列各加入H诊断菌液0.2 ml,第二列各加入O诊断菌液0.2 ml，第三列各加入甲型诊断菌液0.2 ml,第四列各加入乙型诊断菌液0.2 ml, 第五列各加入丙型诊断菌液0.2 ml,混匀，置37℃水浴箱18-24小时。
结果判断：菌体沉淀至试管底成圆点为阴性管，出现散在颗粒状凝集为阳性管。以最高稀释管出现散在颗粒状凝集为报告滴度。若阴性对照出现凝集则需重新稀释配制诊断菌悬液重做试验。
4.8 外菲氏试验：标本标明编号，以3000转/分钟离心5分钟;取试管架，按每标本排3排试管，每排5支;各标本用加样器取100μl血清置于一支稀释用试管(注明检验号)中，加入1.9ml 0.9%生理盐水混匀，第一排加入1：20倍稀释血清各0.2ml，成1：40倍;稀释管留1.0ml再加入1.0ml 0.9%生理盐水，成1：40倍稀释，加入第二排试管各0.2 ml。同样方法对倍稀释至第四排试管，第五排各加入0.2ml 0.9%生理盐水作阴性对照。从冰箱中拿出外菲氏反应试验稀释菌悬液，第一列各加入OX19诊断菌液0.2 ml,第二列各加入OX2诊断菌液0.2 ml，第三列各加入OXK诊断菌液0.2 ml,混匀，置37℃水浴箱18-24小时。
结果判断：菌体沉淀至试管底成圆点为阴性管，出现散在颗粒状凝集为阳性管。以最高稀释管出现散在颗粒状凝集为报告滴度。若阴性对照出现凝集则需重新稀释配制诊断菌悬液重做试验。
5.引用表格
5.1拒收标本记录表：
篇2：临床微生物标本采集与送检规范
临床微生物标本采集与送检是目前临床实验室诊断质量保证中较为薄弱的环节,严重影响临床微生物学实验室对感染样本中致病菌的分离培养的阳性率和医院感染病原体监控,也影响临床诊断,合理选用抗菌药物,降低耐药菌的产生和提高感染的治愈率,而且对预测或及时发现医院感染的暴发流行、杜绝感染蔓延、研究医院感染的发病机制和环节、制定有效的医院感染控制措施等,均具有十分重要的意义。严格实施正确的微生物标本送检和检验方法,是做好医院感染病原体监测的关键。鉴此,希望临床各科能按照本操作规范采样送检。
一、医院感染标本的采集和运送基本原则
1.发现医院感染应及时采集微生物标本作病原学检查,我院总的医院微生物标本送检率应不低于70%。
2.尽量在抗菌药物使用前采集标本。
3.标本采集时应严格执行无菌操作,减少或避免机体正常菌群及其他杂菌污染。
4.标本采集后立即送至实验室,床旁接种可提高病原菌检出率。
5.以棉拭子采集的标本如咽拭子、肛拭子或伤口拭子,应立即送检。
6.盛标本容器须经灭菌处理,但不得使用消毒剂。
7.送检标本应注明来源和检验目的,使实验室能正确选用相应的培养基和适宜的培养环境,必要时应注明选用何种抗菌药物。
二、常见医院感染标本送检方法
1.血液与骨髓
①通常采血部位为肘静脉。疑似细菌性心内膜炎时,以肘动脉或股动脉采血为宜。切忌在静脉点滴抗菌药物的静脉处采取血标本。
②采血部位的局部皮肤应严格消毒。将采集的血液注入血培养基前,应更换针头或过火消毒针头。血培养瓶应在避光室温中保存,不必置冰箱保存。
③每次采血量成人5一10ml,婴幼儿l一5ml,培养基与血液之比以lO:1为宜,以稀释血液中的抗菌药物、抗体等杀菌物质。
④怀疑菌血症应尽早采血,体温上升阶段采血可提高阳性率,但要防止因等待而延误时机。对已用抗菌药物而又不能停药者,可在下次用药前采血。
⑤每例病人至少采血两次,间隔0.5一lh,以利于提高阳性率和区分感染菌与皮肤污染菌。
⑥对疑为细菌性骨髓炎或伤寒病人,在病灶部位或髂前(后)上棘处严格消毒后抽取骨髓lml作增菌培养。
2.尿液
①中段尿:女性采样前应先用肥皂水或0.1%高锰酸钾溶液冲洗外阴部及尿道口;男性须翻转包皮冲洗,用O.1%新洁尔灭消毒尿道口.灭菌纱布擦干后收集标本。
②导尿管导尿采样可减少污染。对留置导尿者,可用碘酒消毒尿道口处的导尿管壁,用空针细针头斜穿管壁抽吸尿液。或消毒后解开接口,弃去导尿管前段尿液、留无污染的膀胱内尿液数毫升送检。不可从集尿袋的下端管口留取标本。
③尿厌氧菌培养,或婴幼儿中段尿采集困难,或培养结果与病情不符时,可经耻骨上皮肤穿刺采集无污染的膀胱内尿液。
④送检标本以早晨第一次尿液为佳。
⑤室温下尿标本耽搁稍久,可致尿内细菌浓度明显增加而影响病原菌与污染菌的区分。不能立即送检者,可暂存4℃冰箱。
3.痰液
①咳痰:清水反复漱口后用力咳嗽,从呼吸道深部咳出新鲜痰液于无菌容器送检。痰量极少者可用45℃的lO%氯化钠溶液雾化吸入导痰。
②对咳嗽乏力或昏迷病人,可用吸痰管经鼻腔或口腔抵达气管腔内吸引痰液。用纤维支气管镜可直接在病灶部位采集高浓度的感染病原菌,但不能完全避免咽喉部正常菌群污染。
③双侧肺部感染伴人工气道如气管切开或气管插管患者,可用吸痰管经人工气道插至肺支气管水平吸引痰液。
④对重症、难治、或伴免疫抑制、或疑似厌氧菌引起的医院内肺部感染,可采用环甲膜穿刺经气管吸引(TTA)、经胸壁穿刺肺吸引(LA)、经纤维支气管镜或人工气道作防污染双套管毛刷(PSB)或防污染支气管肺泡灌洗(PBAL)采集无口咽部菌群污染的痰液,进行感染病原学诊断。
⑤痰标本不能及时送检者,可暂存4℃冰箱。如果室温下延搁数小时,定植于口咽部的非致病菌可呈过度生长,而肺炎球菌、葡萄球菌和流感杆菌检出率则明显下降。
4.伤口、烧伤创面与脓液
①用无菌生理盐水擦洗病灶表面后,用棉拭于取病灶深部的脓液和分泌物,置运送培养基内送检。
②对未渍破的脓肿宜用碘酒、酒精消毒皮肤后,以无菌注射器抽取脓液送检:也可于切开排脓时用无菌棉拭子采样。
5.粪便
①排便后,挑取有脓血、粘液部分的粪便约2—3g(液状粪便则取絮状物),盛于灭菌广口瓶或蜡纸盒送检。用棉拭子挑取粪便插入Cnry—BLair运送培养基或PH7.0的磷酸盐甘油中送检,可提高病原菌检出率.
②对不易获取粪便者或婴幼儿,可用直肠拭于(又称肛拭)采集。将拭子前端用无菌甘油水湿润,然后插入肛门约4—5cm(幼儿约2—3cm)处,轻轻旋转擦取直肠表面粘液后退出置运送培养基内送检。
6.咽拭、口腔拭子
①病人清水嗽口后.由检查者将其舌外拉使悬雍垂尽可能向外牵引,棉拭子越过舌根到咽后壁或悬雍垂的后侧,反复擦拭数次,插入运送培养基。棉拭子应避免触及舌、口腔粘膜和唾液。
②对化脓性扁桃体炎或口腔念珠菌病,用棉拭子在病灶部位擦拭数次即可。
7.浆膜腔积液、脑脊液
①浆膜腔积液包括胸水、腹水如心包液、关节液和鞘膜液等.以严格无菌操作抽取数毫升液体置无菌试管或小瓶送检。对易自凝的标本可添加抗凝剂。
②严格无菌操作下采取脑脊液数毫升置于无菌试管。标本采集后应立即送检,以防细菌死亡。疑似有脑膜炎奈瑟菌时,应注意保暖,不可置冰箱保存。
8.生殖道标本
①根据不同感染种类和病变特征采集不同的标本。采集尿道标本时,应先用生理盐水局部清洗,以无菌棉拭子插入尿道口l一2cm停留十余秒钟。轻轻旋转拭子后退出.
②对外阴部糜烂、溃疡者,经生理盐水清洗后用棉拭子擦取病灶边缘的分泌物。
③阴道和官颈口分泌物须在窥阴器下用长棉拭子采集。
④子宫内分泌物需用无菌导管抽取.导管外套一层保护膜,插入子宫后再刺穿该膜予负压吸引,可减少阴道菌群污染。
⑤女性盆腔脓肿,应在阴道局部消毒后,由直肠子宫凹陷处进针抽取。
⑥前列腺液需进行前列腺按摩获取。
9.组织标本
①表浅的感染组织和各种窦道标本可用棉签擦拭、小刀刮取、穿刺抽吸或手术切除。对窦道和痰管应深部刮取管壁组织。
②深部组织标本可经皮肤穿刺采集或手术切取。标本置无菌容器并加少量生理盐水以保湿度,或置肉汤增菌液,或置血平皿送检。
③尸检标本应于死后20h内采取,以防肠道等菌群侵入引起污染。
④作病原体分离的组织标本,不可用福尔马林固定。疑有污染的较大组织块,可用烧红的烙铁烧灼其表面或置沸水中5—10秒钟使表面变白消除污染后,再用无菌器械切开组织,取中央部位组织送检。
10.静脉导管
从病人体内拔出静脉插管,用无菌技术剪去导管体外部分。体内段导管立即置血平皿上作滚动涂布接种。不能作床旁接种者,将导管置含有少量生理盐水的无菌试管内送检。也可将剪下的导管体内段置肉汤增菌液或置于血培养液内,但不能区分导管感染菌与少量的定植菌。
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